常用熒光光源介紹
熒光光源主要應用在熒光顯微鏡中,是細胞生物學的基本工具,它是由光源、濾光片、透鏡等光學系統等主要部件組成,是利用一定波長的光激發標本發射熒光,通過物鏡和目鏡系統放大觀察標本的熒光圖像而實現對熒光樣品的定性定量研究。
激發、濾光、成像、淬滅。熒光實驗的調整本質上就是協調好以上四個因素得到最好的效果,一個常被忽視的方面是光源的使用,熒光顯微鏡的常用光源主要有白光光源、高壓汞燈、氙燈、金屬鹵素燈、LED,以及最新的二極管激光光源。
1、汞燈
超高壓汞燈(50≤200 W)由石英玻璃制成,中間呈球形,并含有一定量的汞,它在兩個電極之間排出,導致汞蒸發,球體內的壓力迅速增加,當汞完全蒸發時,可達到50×70標準大氣壓。這一過程一般需要5分鐘左右,超高壓汞燈的發光是電極間放電引起汞分子解離和還原過程中光子發射的結果,它散發出強烈的紫外線和藍紫光,足以刺激各種熒光物質,因此在熒光顯微鏡中得到了廣泛的應用。
2、氙燈
氙燈和汞燈作為白光光源,可以提供從紫外到近紅外的一系列波長,但它們有不同的激發光譜,水銀燈聚焦于近紫外、藍光和綠光,能產生高激發能峰值的明亮熒光信號,但具有較強的光毒性,因此,高壓氧用于固定樣品或弱熒光成像,相比之下,氙光源的激發相對平緩,可以用來比較不同波長之間的強度,比如測量鈣離子濃度。氙燈的強激發為800~1000 nm近紅外。
XBO較HBO的特點:
1)光譜強度更均勻
2)在紅外及中紅外仍有較強光譜強度
3)能量較強更易到達物鏡后孔徑
推薦產品:xbo75w,100W氙氣燈,一般使用壽命:400H,1200h。
3、金屬鹵素燈
這是近年來出現的一種光源。它與汞燈的激發光譜非常相似,但通過光纖連接到顯微鏡上,可以散熱,壽命更長,將光纖從光源連接到顯微鏡可以大大減少光產生的熱量,用于活細胞成像的金屬鹵化物燈的另一個優點是內置的強度設計裝置,它可以很容易地調節受激光。
推薦產品:XPO金屬鹵素燈光源,功率在120W左右,適用于各大廠家的高端熒光顯微鏡,使用壽命2500小時以上。
4、LED。光源開關以毫秒為單位,縮短了樣品在光下的曝光時間,延長了壽命。此外,LED光的衰減是快速和準確的,這可以大大降低光毒性在長期活細胞測試,與白光相比,LED只能在較窄的光譜范圍內激發,多個LED波段使LED光源能夠提供多色熒光的應用。
推薦產品:蔡司科利布里,使用壽命幾千小時。
5、激光光源。它是一種利用二極管發射單波長激光的光源,該光源的好處是激發光波長超窄,成像不容易產生噪點,局限就是各染料廠家提供的熒光染料的激發波長會有差異,如果用單波長的激光激發,有時候會導致激發能量不足的情況。
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